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BTQ-2 dT Linker Amidite，BTQ-2 胸腺嘧啶链节核苷酸酰胺化试剂，化学性质

中文名称：
BTQ-2 胸腺嘧啶链节核苷酸酰胺化试剂（BTQ-2 dT Linker Amidite）

成分与性质及学术介绍

BTQ-2 dT Linker Amidite 是一种高功能化的核苷酸中间体，设计用于固相寡核苷酸合成（Solid Phase Oligonucleotide Synthesis, SPOS）及荧光标记的构建。该试剂通过整合 BTQ-2 荧光团、胸腺嘧啶核苷酸（dT）和可控链节结构（Linker）以及 Amidite 功能化，实现高效偶联、灵活标记和优异的光学性能，为现代核酸探针、分子成像和多模态生物检测提供可靠工具。

一、分子组成

BTQ-2 dT Linker Amidite 的分子结构可划分为以下几个核心部分：

BTQ-2 荧光团
BTQ-2 是一种长波长荧光染料，其激发波长通常位于 620–640 nm，发射波长约 650–670 nm。荧光团的电子共轭体系提供了高量子产率和优异的光稳定性，使其在活体成像、深层组织观察及多通道共聚焦实验中具有显著优势。BTQ-2 荧光团可通过化学修饰整合到核苷酸骨架上，同时保持稳定的荧光输出。

胸腺嘧啶核苷酸骨架（dT）
dT 核苷酸为寡核苷酸链提供天然兼容性和稳定的碱基堆积特性。胸腺嘧啶碱基在偶联过程中不影响荧光团电子体系，同时维持核酸链的正确配对和空间结构，使标记后的寡核苷酸在分子识别和杂交实验中保持功能性。

链节（Linker）结构
Linker 是 BTQ-2 荧光团与 dT 核苷酸骨架之间的可控间隔结构，通常为柔性碳链或聚醚类结构。链节的作用包括：

提高荧光团与核酸链之间的空间隔离，减少荧光淬灭或链内相互作用；

提供偶联灵活性，使荧光团在多种生物实验体系中可自由定位；

优化荧光标记探针的水溶性和分子稳定性。

Amidite 功能化
Amidite 功能化通过二异丙基氰基磷酸酯（diisopropyl cyanoethyl phosphoramidite）实现 3’ 或 5’ 羟基的活化，保证在 SPOS 固相合成循环中高效偶联。Amidite 功能化的稳定性允许在有机溶剂或缓冲条件下操作，确保荧光团和核苷酸骨架在多轮合成过程中保持完整。

二、化学性质

BTQ-2 dT Linker Amidite 兼具化学稳定性、光学性能和反应活性，其主要化学性质包括：

光学性质

激发波长：约620–640 nm；发射波长：约650–670 nm；

高量子产率，信号强度稳定，适合共聚焦显微镜和流式细胞仪检测；

光漂白速率低，可用于长时间动态追踪和活体成像实验。

化学稳定性

Amidite 功能化在干燥和有机溶剂环境中稳定，适合多轮 SPOS 合成循环；

荧光团 BTQ-2 对酸性或碱性缓冲体系相对稳定，可在去保护步骤中保持功能性；

Linker 的柔性和水溶性增强了整体分子的溶解性和结构稳定性。

反应选择性与偶联效率

Amidite 功能化保证磷酸二酯键的高效形成；

Linker 提供空间隔离，使荧光团不会干扰核酸链的配对或空间结构；

适用于多种偶联策略，包括 SPOS 固相合成、NHS 酯偶联以及 click 化学修饰。

三、主要应用

荧光标记寡核苷酸探针
BTQ-2 dT Linker Amidite 可整合到 DNA 或 RNA 链中，实现高效荧光标记。链节结构保证荧光团远离核酸链主链，减少淬灭现象，增强信号稳定性和可重复性。适用于实时 PCR、荧光杂交及核酸定量分析。

荧光原位杂交（FISH）与多通道成像
在 FISH 或多通道共聚焦实验中，BTQ-2 荧光团提供长波长信号，降低细胞或组织自发荧光干扰，可与其他短波长荧光染料组合，实现多重标记和多模态检测。

活细胞及深层组织成像
BTQ-2 长波长荧光使标记的寡核苷酸探针可用于活细胞内动态追踪、RNA 或 DNA 定位分析。链节结构赋予荧光团一定自由度，保证在细胞环境中的灵活性和可操作性。

功能化分子与药物开发
BTQ-2 dT Linker Amidite 可进一步与蛋白质、肽或小分子偶联，实现多模态探针或功能化纳米载体的构建。其化学稳定性和光学特性保证偶联产物在体外和体内实验中均可长期保持功能性。

四、操作特点与注意事项

避光操作，防止荧光漂白；

在干燥和有机溶剂条件下保存，保持 Amidite 活性；

SPOS 循环中需保持链节及 DMT 保护基完整性，保证偶联选择性；

纯化可通过 HPLC 或凝胶过滤完成，并通过质谱或荧光光谱确认结构及光学性能；

Linker 的水溶性有助于溶解度控制，但在高浓度有机溶剂中仍需注意聚集现象。

五、总结

BTQ-2 dT Linker Amidite 是一种高功能化、长波长荧光标记核苷酸中间体，将 BTQ-2 荧光团、胸腺嘧啶核苷骨架及可控链节结构整合，通过 Amidite 功能化实现高效固相偶联。其主要特点包括高光稳定性、长波长荧光、空间隔离的链节设计和高偶联效率。BTQ-2 dT Linker Amidite 在荧光标记寡核苷酸、FISH 多通道实验、活细胞及深层组织成像、功能化分子探针构建及药物开发中具有广泛应用，为分子生物学、细胞生物学及核酸化学研究提供了可靠的实验工具。