磷酸化在细胞信号传导等众多的生物过程中发挥调节作用,是一种常见的可逆的翻译后修饰。蛋白的磷酸化和去磷酸化是一个可逆的过程,在细胞信号转导、调控细胞增殖、发育、分化、凋亡过程中起重要作用。蛋白质磷酸化是调节和控制蛋白质活力和功能的最基本、最普遍、最重要的机制。蛋白样品中,发生磷酸化的蛋白质和肽段含量较低,且存在各种非磷酸化肽段和无机盐的干扰,致使检测磷酸化蛋白和磷酸化肽段较为困难。因此在磷酸化修饰研究中,一般采用具有顺磁特性的多孔琼脂糖 TiO2 磁珠作为工具,对模型样品和复杂样品中的磷酸肽进行富集,提高修饰蛋白丰度。除此之外,还有固相金属亲和色谱富集(IMAC)、磷酸化抗体富集等方法,这些富集方法通常可以根据实验需求进行选择。
背景说明
磷酸化在细胞信号传导等众多的生物过程中发挥调节作用,是一种常见的可逆的翻译后修饰。蛋白的磷酸化和去磷酸化是一个可逆过程,在细胞信号转导、调控细胞增殖、发育、分化、凋亡过程中起重要作用。但常规蛋白样品中,发生磷酸化的蛋白和肽段比例较低,磷酸化蛋白质组学通过特异性富集磷酸化修饰肽段,结合高分辨率质谱技术实现修饰位点精准鉴定与定量分析。
图 磷酸化修饰组学检测流程
实验原理
磷酸化蛋白质组学技术,采用二氧化钛(TiO2)、金属亲和层析(IMAC)等富集策略及磷酸化抗体富集策略(可选)高效富集低丰度磷酸化肽段,提升检测灵敏度。同时,基于Orbitrap Astral等高精度质谱平台,实现全蛋白组磷酸化位点的深度鉴定。
服务流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——样品制备——酶解消化——磷酸化肽段富集——质谱分析——数据检索——生物信息学分析——项目报告
服务内容及说明
适用场景
磷酸化药物靶标筛选及发现;
磷酸化信号通路及机制研究;
磷酸化靶标及其复合物磷酸化动态监测等。
实验周期
样本交付后30个工作日。
实验交付内容
1、实验原始数据
2、生物信息学分析;
3、结题报告等。