在流式细胞术实验中，死细胞的存在会严重干扰数据真实性 —— 它们不仅自发荧光强、非特异性结合抗体，还会导致活化指标假阴性。因此，选择合适的死活染料是流式实验成功的关键一步。BD 生物科学推出的核酸类和胺基类（Fixable Viability Stain，FVS 系列）死活染料，能精准区分活死细胞，相关产品可通过优宁维平台采购，为实验保驾护航。一、为什么流式实验必须关注细胞活性？死细胞对实验的干扰主要体现在三个方面：自发荧光干扰：死细胞自发荧光强，在多个荧光通道呈现对角线假阳性，模糊阳性细胞群边界；非特异性结合增加：死细胞细胞膜破裂，会额外结合抗体，导致背景信号升高，甚至掩盖弱阳性目标群；功能指标失真：死细胞无法正常激活信号通路，若不排除会导致活化型指标（如磷酸化蛋白）假阴性。常规实验操作（离心、洗涤）会产生少量死细胞，而临床样本（如病人血液）、组织制备细胞悬液、长期培养细胞的活性本就较差，因此流式实验建议必加死活染料。二、BD 死活染料的两类核心选择BD 死活染料分为核酸类和胺基类（FVS 系列），两者原理、操作和适用场景差异明显，可根据实验需求选择。（一）核酸类死活染料：PI、7-AAD、DAPI染色原理：细胞膜不通透的核酸荧光染料，死细胞因膜不完整被染色，与 DNA/RNA 可逆结合。操作步骤：完成表面染色后，取 1×10⁶细胞，加入 100μl 细胞悬液；加入对应染料（如 7-AAD 加 5μl，PI 加 10μl，DAPI 加 0.5~2μl），轻摇混匀；避光室温孵育 5 分钟，1 小时内上机检测。注意事项：仅适用于不固定细胞，固定后细胞膜通透性改变会导致活细胞也被染色；染色后避免洗涤、剧烈涡旋，否则染料易脱落；需 4℃保存，不可冻存。优宁维可采购的代表产品：PI（货号 556463），检测通道 PE/PE-CF594，适配 Blue/YG 激光；7-AAD（货号 559925），检测通道 PerCP/PerCP-Cy5.5，适配 Blue/YG 激光；DAPI（货号 564907），检测通道 BV421/BUV，适配 UV/Violet 激光。（二）胺基类染料：BD Fixable Viability Stain（FVS 系列）染色原理：细胞膜不通透的氨基荧光染料，与死细胞内游离胺共价结合（不可逆），活细胞仅表面少量结合，呈弱阳性。核心优势：可用于固定后胞内染色（如细胞因子、磷酸化蛋白检测），这是核酸类染料不具备的；荧光选择丰富，适配多色流式实验；染色后稳定性强，不影响后续固定破膜流程。https://www.univ-bio.com/article/id-8523.html?mk_channel=CSDN